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      國標GB/T18932.1-2002蜂蜜中碳-4植物糖含量測定方法

      點擊: 次 時間:2016-12-27 14:17

      1、范圍

      GB/T18932的本部分規定了蜂蜜中碳-4植物糖含量的穩定碳同位素比率測定方法。本部分適用于各種蜂蜜中碳-4植物(玉米或甘蔗)糖含量的測定。

      2、規范性引用文件

      下列文件中的條款通過GB/T18932的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用于本部分,然而,鼓勵根據本部分達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本部分。

      GB/T6682-1992分析實驗室用水規格和試驗方法(neqISO3696:1987)

      3、原理

      試樣在具有純氧脈沖及催化劑存在的在線式全自動Dumas燃燒管中燃燒,經化學純化及氣相色譜儀GC分離后用穩定碳同位素質譜儀測定其δ13C值。以蜂蜜蛋白質δ13C值為標準,蜂蜜δ13C值與其進行比較,根據其差值來計算蜂蜜中碳-4植物糖的含量。

      4、試劑及材料

      除非另有說明,所用試劑均為分析純,水為GB/T6682-1992規定的一級水。

      橄欖油標準:%C=57.00,δ13C PDB=一29.07%。

      鎢酸鈉(Na2WO4·2H20 )

      硫酸:優級純

      0.10mm-0.14mm孔徑尼龍濾布。

      10uL移液器。

      8mmX5mm錫杯。

      10%鎢酸鈉溶液:稱取10g鎢酸鈉,用水定容至100ML。

      0.335mol/L硫酸溶液:移取9.4ml,硫酸,用水定容至500mL

      5、儀器

      5.1 INTEGRA-CN在線式全自動穩定同位素質譜儀或相同性能的同位素質譜儀,δ13C測定精度0.1%。

      載氣:氦氣,純度99.999%;助燃氣:氧氣,純度99.999% .

      5.2 離心機:相對離心力(RCF) :1500Xg

      5.3 水浴鍋,十分之一電子天平,移液器,烘箱

      試樣制備與保存

      6.1 試樣制備

      對無結晶的實驗室樣品,將其攪拌均勻。對有結晶的樣品,在密閉情況下,置于不超過60℃的水浴中溫熱,振蕩,待樣品全部融化后攪勻,迅速冷卻至室溫。分出0.5kg作為試樣。制備好的試樣置于樣品瓶中,密封,并標明標記。

      6.2 試樣保存

      將試樣于常溫下保存。

      分析步驟

      7.1 試料的制備

      7.1.1 蜂蜜樣品

      蜂蜜樣品經0.10mm-0.14mm孔徑尼龍濾布過濾,除去蜂蜜中固體雜質后,用移液器移取3mL至8mmX5mm錫杯中,密封備用。每個樣品制備2個

      7.1.2 蜂蜜蛋自質樣品

      稱取10g~ 12g潔凈的蜂蜜樣品于50mL離心管中,加人4mL水混勻。在一支20ml,量筒中加入2.0mL10%鎢酸鈉溶液和2.0mL0.335mol/L硫酸溶液,迅速混勻后,加到上述盛蜂蜜樣品的離心管中,混勻。置于80℃水浴中加熱不少于30min,在加熱過程中每間隔5min-10min旋轉混合離心管中內容物20s,直到有絮狀物析出。以水注滿離心管并混合后, 在RCF為1500Xg下離心5min,傾掉上層清液, 再以約50ml水充分洗滌沉淀物并離心,如此反復洗滌沉淀物5次,最后倒干上清液,將含有沉淀蛋白質的離心管置于750℃烘箱中干燥3h以上。然后,稱取上述烘干的蛋白質3.0mg,于8mmX5mm錫杯中,密封備用,每個樣品制備2個。

      7.1.3 標準物及控制樣品

      移取2mL橄欖油標準于8mm X 5mm錫杯中,密封備用,此標物作為蜂蜜樣品檢驗批的標準和控制樣品移取1m1橄欖油標準于8mm X 5mm錫杯中,密封備用,此標物作為蜂蜜蛋白質樣品檢驗批的標準和控制樣品。

      7.2 測定

      7.2.1 位素質譜儀的預調

      確認I N TEG RA- CN 同位素質譜儀的工作環境、 氣密性、離子室的真空度均符合要求, 然后檢驗INTEGRA - CN的穩定性和峰 形, 必 要時調整離子源參數值。確認數據采集系統設置正確,必要時進行調整

      7.2.2 檢驗批的設置

      在碳同位素測定條件下,選定兩點標準漂移校正模式, 設定標準名稱, 輸人標準參數, 根據待測樣品的多少設定檢驗批。

      7.2.3 試料測定

      按照已設定檢驗批的順序,在自動進樣器上擺放好待測試料, 在計算機控制下, 運行檢驗批進行測定。測定完畢后, 試 料的δ13C 值由計算機自 動計算給出。同一樣品的蜂蜜δ13C 值和其蛋白質δ13C值應在相同的儀器條件下測定。

      8、結果計算

      蜂蜜中碳一4植物糖的含量按式(1)計算:

      式中:

      X — 蜂蜜中碳-4 植物糖的百分含量;

      δ13CP—蜂蜜中蛋白質δ13C值;

      δ13C H—蜂蜜δ13C值;

      - 9.7— 玉米糖漿的平均δ13C值。

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