常見的三種高效液相色譜法介紹

一、液固吸附色譜法（LSC）      

 流動相為液體，固定相為固體吸附劑。

1、分離機制：利用溶質分子占據固定相表面吸附活性中心能力差異； 

分離前提：K不等或k不等；

2、固定相：與LC比，固定相粒徑不同（<10μm）； 

3、流動相：底劑（烷烴）+有機極性調節劑。

4．影響K的因素：

與固定相性質和流動相性質有關；

溶質分子極性↑，洗脫能力↓，k↑，tR↑；

溶劑系統極性↑，洗脫能力↑，k↓，tR↓；

注：調節溶劑極性，可以控制組分的保留時間；

5、出柱順序：強極性組分后出柱，弱極性組分先出柱；

6、硅膠吸水量↑，LSC→LLC

硅膠含水量較小，吸附色譜，硅膠極性較大；

硅膠含水量>17% ，分配色譜，硅膠失活→載體；

吸附的水→固定液

二、液-液分配色譜法（LLC）

1、分離機制：利用組分在兩相中溶解度的差異

2、固定相：載體+固定液（物理或機械涂漬法）

缺點：

系統內部壓力大，易流失，不實用

固定液-極性→NLLC

固定液-非極性→RLLC

3、①正相色譜-固定液極性>流動相極性（NLLC）

極性小的組分先出柱，極性大的組分后出柱：適于分離極性組分；

②反相色譜-固定液極性<流動相極性（RLLC）

極性大的組分先出柱，極性小的組分后出柱：適于分離非極性組分；

三、化學鍵合相色譜法（BPC）

1、化學鍵合相 

（1）分離機制：分配+吸附（以LLC為基礎）；

（2）特點：不易流失；熱穩定性好；化學性能好；載樣量大；適于梯度洗脫；

2、反相鍵合相色譜

（1）分離機制：疏溶劑理論； 

正相-流動相與溶質排斥力強，作用時間↑，K↑，組分tR↑；

反相-流動相與溶質排斥力弱，作用時間↓，K↓，組分tR↓；

（2）固定相：極性小的烷基鍵合相；

C8柱，C18柱（ODS柱-HPLC約80%問題）；

（3）流動相：

極性大的甲醇-水或乙腈-水；

流動相極性>固定相極性；

底劑+有機調節劑（極性調節劑）；

例：水+甲醇，乙腈，THF；

（4）流動相極性與k的關系：流動相極性↑，洗脫能力↓，k↑，組分tR↑

（5）出柱順序：極性大的組分先出柱；極性小的組分后出柱；

（6）適用：非極性~中等極性組分（HPLC 80%問題）

3、正相鍵合相色譜

(1)分離機制：溶質分子與固定相之間定向作用力、誘導力、或氫鍵作用力

(2)固定相：極性大的氰基或氨基鍵合相；

(3)流動相：極性小（同LSC）；底劑+有機極性調節劑； 例：正己烷+氯仿-甲醇，氯仿-乙醇。

(4)流動相極性與K的關系：流動相極性↑，洗脫能力↑，組分tR↓，k↓；

(5)出柱順序：結構相近組分，極性小的組分先出柱，極性大的組分后出柱；

(6)適用：氰基鍵合相與硅膠的柱選擇性相似（極性稍小），分離物質也相似；氨基鍵合相與硅膠性質差別大，堿性，分析極性大物質、糖類等；

4、離子對色譜和離子抑制色譜

反相離子對色譜法（IPC或PIC） 

反相色譜中，在極性流動相中加入離子對試劑，使被測組分與其中的反離子形成中性離子對，增加K和tR，以改善分離；

(1)離子對試劑：烷基磺酸鈉→分析堿，四丁基季胺鹽→分析酸

(2)影響K的因素:

a．與m的極性有關（同反相色譜）；

b．與R的鏈長有關：R↑長，極性↓小，tR↑，k↑；

(3)適用：

較強的有機酸、堿；反相離子抑制色譜；

在反相色譜中，通過加入緩沖溶液調節流動相pH值，抑制；

組分解離，增加其K和tR，以達到改善分離目的；

1）離子抑制劑：弱酸、弱堿性物質； pH一定的緩沖溶液；

2）K的影響因素：與流動相極性有關，還與pH值有關；

選擇流動相：應同時考慮極性及pH值； 

酸性物質-加入酸HAc，tR↑，K↑； 

堿性物質-加入堿NH3·H2O，tR↑，K↑；  

調節pH范圍：3.0~8.0；pH>8.0破壞鍵合相與載體的結合；pH<3.0腐蝕柱子；

3）適用：

極弱酸堿物質；pH=3~7弱酸；pH=7~8弱堿；兩性化合物。

（內容參考小木蟲論壇）