用液相色譜外標法進行含量檢測實驗有哪些注意事項

液相色譜法檢測含量是液相色譜儀分析工作的重要的一項，液相色譜法檢測含量用的基本是外標法和內標法。其中外標法檢測的準確性受到更多因素的影響，更需要豐富的經驗來避免或減小誤差。

首先，我們來看看外標法含量檢測的計算公式：

含量=m對*P*A樣*V樣/（m樣*A對*V對）*100%，

其中的任何一項發生了改變，都會使得檢測結果發生變化，而這其中的任何一項，都有很多種原因使其發生變化。下面逐一分析。

一、m對/m樣——對照品稱樣量/樣品稱樣量

1、天平是否經過校準，其是否在正常工作狀態，稱量時天平是否帶有靜電，是否有空氣流動，這些都是影響讀數的因素。

2、稱量方式采用的是加量法還是減量法，都是很有講究的。正常情況下，肯定要采用加量法，一次稱取到位，這樣才能得到準確的稱樣量。

3、稱量操作稱量時，是否足夠小心，不會在轉移樣品時使樣品撒漏，這個是非常重要的。

4、樣品性質。

樣品如果具有揮發性，直接稱樣時，必然會揮發一部分造成誤差；另外，如果樣品不穩定，或在溶液中不穩定，那么實際上來講，也是影響了樣品量。還有，樣品要保證均勻，固體不必說，液體樣品要保證是均相，稱量之前要搖勻。

5、稱樣量。

對于萬分之一電子天平，稱樣量最好能在100mg以上；對于十萬分之一電子天平，稱樣量應在10mg以上。

二、P——對照品含量

1、對照品質量對照品是否有合法來源，其含量值是否準確。

2、對照品的保存對照品是否按要求保存，也是至關重要的。因為如果對照品沒有按照規定保存，那么其右可能會發生降解，進而影響含量值；另外，如果對照品是保存在冰箱中，稱量時，應取出放在干燥器中回至室溫再稱量，否則其很有可能會吸收空氣中的水分，影響含量值。同理，如果對照品引濕性很強的話，長期暴露在空氣中，也會使其P發生變化。

三、A樣/A對——樣品峰面積/對照品峰面積

1、方法的可靠性。

如果所用的分析方法可靠性不好，樣品峰面積或保留時間容易變化，那么檢測結果也是很重現性不好的。關于方法的可靠性，做過分析方法驗證的人應該都能明白，這里包括系統適用性、精密度、準確性和耐用性以及線性等。

2、儀器進樣精密度。

這其實可以包括在上述3.1因素中。

3、殘留或污染。

如果儀器系統被污染產生殘留，而本身峰面積就不大的情況下，這個因素產生的誤差就更明顯了。

4、積分。

如果樣品峰形不夠好，或者分離度不夠好的情況下，積分就很重要。

四、V樣/V對——樣品稀釋體積/對照品稀釋體積

1、容量瓶、移液管等體積是否準確。

一般來說，新買的容量瓶體積是符合要求的，但是也難免會買到個別次品，這就需要進行校驗了。

2、容量瓶、移液管規格。

這個是很重要的，一般大家都能注意這個問題，做到合理使用。

3、容量瓶等使用習慣。

容量瓶在使用時，不能使其至于高于40攝氏度的環境下，否則容量瓶會發生變形。

4、定量操作。

這個包括容量瓶和移液管的使用，注意事項一是移液管吸液時，液面不要高刻度太多，放液時千萬不要用洗耳球吹，并且盡量保持每次操作時間都一樣，粘度大的溶液尤其需要如此。二是觀察液面時，要使容量瓶和移液管保持垂直，這時很多人喜歡用三根手指捏住，其實這樣不容易保持垂直，最好用兩根手指，輕輕捏住就好。三是注意接觸容量瓶移液管等的面積越小越好，以免體溫加熱溶液。

5、溫度。

a）如果對照品和樣品沒有用同一份稀釋劑稀釋的話，兩者就會有差異，受到溫度變化的影響也是不一樣的。比如，所用的稀釋劑為水：甲醇=50：50，對照溶液用的是上次配好的，然后樣品用的是新配的，因為水和甲醇混合會放熱，其體積也會增大，等到進樣時，樣品溶液回至室溫，體積減小，就會造成檢測結果偏高。

b）如果前后室溫變化的話，也會造成分析結果的誤差。比如，對照溶液進樣時，是正常上班時間，實驗室開了空調，溫度為20℃，而到樣品溶液進樣時，已經到下班時間了，實驗室人員下班時將空調關閉，實驗室溫度已經降為10℃，這時樣品溶液濃度肯定也會增大。

c）由于對照品相對比較貴重，一般實驗室都會保存一段時間。如果下次分析時沒有回至室溫，或此時室溫與對照品溶液配制時的溫度已經發生了明顯的變化，都會造成分析結果的誤差。

d）有些人配好樣品后，喜歡用手去握著容量瓶，細心觀察的就會發現一會之后液面就明顯高于刻度。如果操作者沒有注意這點，有的樣品立即進樣，有的排隊過了一會再進樣，就會造成誤差。

以上所述的，稀釋劑為純有機溶劑或有機溶劑比例很高的情況下，誤差更明顯，而這些往往容易被忽視。

（內容來源液相色譜之家）