高效液相色譜儀的衍生化技術介紹

     高效液相色譜儀的衍生化技術衍是指將用通常檢測方法不能直接檢測或檢測靈敏度比較低的物質與某種試劑（即衍生化試劑）反應，使之生成易于檢測的化合物的過程。按衍生化方法可分為柱前衍生化和柱后衍生化。

一、柱前衍生化： 柱前衍生化是指將被測物轉變成可檢測的衍生物后，再通過色譜柱分離。 這種衍生化可以是在線衍生化，即將被測物和衍生化試劑分別通過兩個輸液泵送到混合器里混合并使之立即反應完成，隨之進入色譜柱；也可以先將被測物和衍生化試劑反應，再將衍生物作為樣品進樣；也可以在流動相中加入衍生化試劑，進樣后，讓被測物與流動相直接發(fā)生衍生化反應。

二、柱后衍生化： 柱后衍生化是指先將被測物分離，再將從色譜柱流出的溶液與衍生化試劑在線混合，生成可檢測的衍生物，然后導入檢測器。按生成衍生物的類型可分為紫外可見光衍生化、熒光衍生化、拉曼衍生化和電化學衍生化等。
1、紫外可光見衍生化： （1）紫外衍生化是指將紫外吸收弱或無紫外吸收的有機化合物與帶有紫外吸收基團的衍生化試劑反應，使之生成可以用紫外檢測的化合物。如胺類化合物容易與鹵代烴、羰基、酰基類衍生試劑反應。 （2）可見光衍生化有兩個主要的應用：一是用于過渡金屬離子的檢測，將過渡金屬離子與顯色劑反應，生成有色的配合物、螯合物或離子締合物后用可見光檢測；二是用于有機離子的檢測，在流動相中加入被測離子的反離子，使之形成有色的離子對化合物后，分離檢測。
2、熒光衍生化： 熒光衍生化是指將被測物與熒光衍生化試劑反應后生成具有熒光的物質進行檢測。 有的熒光衍生化試劑本身沒有熒光，而其衍生物卻有很強的熒光。 衍生化技術不僅使高效液相色譜儀分析體系復雜化，而且需要消耗時間，增加分析成本，有的衍生化反應還需要控制嚴格的反應條件。因此，只有在找不到方便而靈敏的檢測方法或為了提高分離檢測的選擇性時，才考慮用衍生化技術。


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