實驗室中高效液相色譜儀重要器件應該如何維護和保養？

第一、檢測器的維護和保養

 

1.檢測器是高效液相色譜儀器的數據收集部分，由很多的電子和光學元件組成。禁止拆卸更動儀器內部元件防止損壞或影響準確度。

 

2.儀器內部的流通池是流動相流過的元件，樣品的干凈程度和微生物的生長都可能污染流通池，導致無法檢測或檢測結果不準，所以在使用了一段時間以后要先用水沖洗流通池和管路再換有機溶劑沖洗。

 

3.當儀器檢測數據出現明顯波動，基線噪音變大時要沖洗儀器管路沖洗后如果還是沒有改善就應該檢測氘燈能量，如果能量不足就因更換新的氘燈。

 

4.儀器在每次使用完了以后都要用水和一定濃度的有機溶劑沖洗管路，保證下次使用時管路和系統的清潔。

 

第二、高壓恒流泵的維護和保養

 

1.高壓恒流泵為整個色譜系統提供穩定均衡的流動相流速，保證系統的穩定運行和系統的重現性。高壓輸液泵由步進電機和柱塞等組成，高壓力長時間的運行回逐漸磨損泵的內部結構。在升高流速的時候應梯度勢升高，最好每次升高0.2ml/min當壓力穩定時再升高，如此反復直到升高到所需流速。

 

2，在儀器使用完了以后，要及時清晰管路沖洗泵，保證泵的良好運轉環境，保證泵的正常使用壽命。

第三、色譜柱的維護和保養

 

1.所使用的流動相均應為HPLC級或相當于該級別的，在配置過程中所有非HPLC級的試劑或溶液均經0.45um薄膜過濾。而且流動相使用前都經過超聲儀超聲脫氣后才使用。

 

2.所使用的水必須是經過蒸餾純化后再經過0.45um水膜過濾后使用，所有試液均新用新配。并且在進樣的樣品都必須經過0.45um薄膜針筒過濾后進樣。

 

3.本公司檢驗項目中所使用到的最大流速為1.0ml/min，所以流速提升過程應是梯度提升，不存在流速的突升突降。

 

4.在儀器檢測完了后，均使用水：甲醇=90：10清洗了管路和色譜柱1小時以上，使用水：甲醇=90：10保存管路和色譜柱40分鐘以上。

 

高效液相色譜儀注意事項

液相色譜是指樣品組分在柱填料和流動相之間進行的物質交換以達到分離的目的因此流動相要求具有以下特點：

 

純度流動相在使用前必須使用高效液相色譜儀試劑和過濾器去除顆粒雜質和其他物質（用0.45um或更細的膜過濾）雜質在色譜柱上的積累將影響色譜柱的使用壽命。

 

溶解度樣品的溶解度應適當。如果溶解度不好，樣品會在柱頭沉淀，不僅影響提純分離，而且縮短柱的使用壽命。

 

低粘度（小于2cp）高粘度的溶劑會影響溶質的擴散傳質，降低塔效，增加塔壓降，延長分離時間。選擇沸點低于100℃的流動相。

 

樣品易于回收應選擇揮發性溶劑。

 

當流動相pH值用于反相色譜分離弱酸（3≤pKa≤7）或弱堿（7≤pKa≤8）樣品時，控制樣品組分離解的技術，提高組分在固定相上的保留率和改善峰型被稱為反相離子抑制技術。對于弱酸，流動相的pH值越小，組分的K值就越大。當pH值遠遠低于弱酸的pKa值時，弱酸主要以分子形式存在，但對于弱堿性，相反是真實的分析弱酸樣品時流動相通常加入少量弱酸一般為50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液；分析弱堿樣品時流動相通常加入少量弱堿一般為50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。