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      如何保存和更換色譜柱

      點(diǎn)擊: 次 時(shí)間:2016-09-27 10:18

      一、色譜柱的保存

      色譜柱用進(jìn)樣墊將色譜柱的兩端封住,并放回原包裝。在安裝時(shí)要將色譜柱的兩端截去一部分,以確保沒有進(jìn)樣墊的碎屑?xì)埩粲谥小?/p>

      二、色譜柱的重新安裝

      色譜柱重新安裝時(shí),密封要注意:

      a.安裝位置(尺寸)要重現(xiàn),否則引起峰靈敏度變化;

      b.安裝時(shí)防止碎渣進(jìn)入色譜柱引起峰形拖尾;

      c.不需要擰得太緊;

      e.使用清潔的密封墊,避免用手接觸密封墊,以防手上的油脂污染;

      f.密封墊安裝前,要仔細(xì)檢查有無損傷,以防安裝后,有問題時(shí)不易拆除;

      g.對那些不宜重復(fù)使用,如石墨密封墊,重新安裝柱時(shí)要注意及時(shí)更換。

      三、色譜柱的更換

      分離度是考察一根色譜柱分離具體樣品的好壞程度的指標(biāo)。色譜的核心任務(wù)就是為了使每個(gè)峰完成分離,得到有合理峰寬的色譜峰,以便獲得較低的檢測限。然而,塔板數(shù)對分離度的影響僅僅是平方根的關(guān)系,當(dāng)一根色譜柱的塔板數(shù)下降50%,分離度僅下降7%。

      其實(shí),大多數(shù)用戶僅僅使用色譜柱塔板數(shù)的一小部分。例如,對一支新的150mm×4.6mm,5mm粒徑的色譜柱來講,廠家測試報(bào)告上的塔板數(shù)為14,000。使用下面的公式可以估算一支色譜柱的塔板數(shù):

      N=3000L/Dp ,其中                   

      L是色譜柱的柱長,以厘米為單位;Dp是填料的粒徑,以微米為單位。

      一支150mm×4.6mm,5mm粒徑的色譜柱的柱效大約為9000,比廠家測試數(shù)據(jù)低30%。在實(shí)際的工作中,大多數(shù)色譜方法僅僅需要這些塔板數(shù)的一半,可見,色譜柱的塔板數(shù)不是分離中最重要的參數(shù)。

      較好的方法是使用壓力、分離度和峰形的混合指標(biāo)來考察一根色譜柱的狀態(tài)。

      壓力的測量是最容易的,通常我們確定的色譜方法要滿足以下的要求:用新柱子時(shí)柱壓不高于2500psi,在任何情況下壓力都不超過3000psi。有統(tǒng)計(jì)表明,超過60%的色譜柱損壞是由于壓力過高的原因。

      分離度是考察色譜柱的一個(gè)非常重要的指標(biāo),只要兩個(gè)組分可以獲得基線分離,對該分析物的定量就不會(huì)有什么問題。對于高斯峰來講,1.5的分離度即可得到基線分離;若分離度在1.7至2.0之間則更好。若峰拖尾嚴(yán)重則需要更高的分離度。使用分離度作為色譜柱的評(píng)價(jià)指標(biāo)的好處在于我們可以直觀地看到相鄰的峰的分離情況。

      另外一個(gè)考察色譜柱質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)是峰形拖尾情況,廠家測試報(bào)告的峰形都非常漂亮,但這并不代表該色譜柱分析實(shí)際樣品的情況。

      通常,在開發(fā)分析方法的過程中,一般會(huì)試驗(yàn)幾根色譜柱,分析足夠多的實(shí)際樣品,就知道當(dāng)分離變差時(shí)是什么樣的情況。在開始時(shí)可使用一個(gè)寬的范圍;如果在開始時(shí)緊縮系統(tǒng)適用性要求,在方法認(rèn)證后再放寬這個(gè)要求,是很困難的。在分析實(shí)際樣品之前進(jìn)行系統(tǒng)適用性考察,以確保該色譜方法滿足分析者可以接受的標(biāo)準(zhǔn)。

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