液相色譜柱參數有哪些

本文主要介紹液相色譜柱參數，分為物理性質參數和化學性質參數。

一、液相色譜柱物理性質參數

1、柱長，內徑

如250*4.6mm。一般柱長在2—250mm，柱越長，分離度越高，但柱壓更高，分離所需時間更長;但分離度與理論塔板數的平方根成正比，所以一昧增加柱長并不是最有效的分離手段，一般情況下，150mm、5um的填料可以提供足夠的塔板數。

2、粒徑

粒徑影響色譜分離度。粒徑越小，分離越快，柱效越高，但柱壓力越高，柱容易被污染，導致柱壽命降低。常見分析柱通常使用5um填料，復雜的多組分樣品分離一般使用3.5um粒徑，更大內徑的制備色譜柱通常使用更大的粒徑。如果固定相選擇是正確，但是分離度不夠，那么選用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而，3.5um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍，因此如何選擇填料粒徑需要根據現實情況而定。

3、孔徑　

孔徑，60A，120A，300A等。孔徑小，則含孔率高，比表面積大，載碳量高;色譜柱填料孔徑大小需和分子大小相匹配，保證分子自由進出填料孔并與孔內表面的鍵合相進行分離分配，通常要求孔徑直徑是分子直徑的3倍以上，一般小分子使用80—120A，大分子使用300A。

4、顆粒形狀

顆粒形狀，一般有球形和不規則形，當使用黏度較大的流動相時，球形顆粒可以降低柱壓，延長色譜柱壽命。

5、比表面積

比表面積，指的是每克填料的表面積，如180m2/g—350m2/g，與粒度和含孔率有關;比表面積大，會增加樣品與鍵合相之間的反應，增加保留和分離度;比表面積小則可以縮短分析時間和平衡時間，并不是比表面積大或者小就更好，需要選擇合適的比表面積。

二、液相色譜柱化學性質參數

1、硅膠基質

硅膠基質是最通用的基質，強度大，化學修飾容易，但使用的pH值范圍有限(一般為2—8，特殊修飾的可以達到1—12)。

2、聚合物基質

聚合物基質多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂，化學穩定，應用pH范圍寬，具有更強的疏水性，對蛋白質等樣品分離效果較好;但強度較小，有機溶劑可能導致聚合物溶脹而受損，批次重復性較差，商品化色譜柱不多，一般價格較貴。

3、載碳量

載碳量是基質表面鍵合相的比例，載碳量高，則保留增加，適合分析非極性化合物。

4、鍵合相

鍵合試劑不同，對化合物的選擇性不同，一般長鏈的烷基鍵合相(C18 C8)比短鏈的(C4 C3)穩定;非極性的鍵合相比極性的鍵合相(-NH2)穩定。

5、封端

用短鏈將裸露的硅羥基鍵合后封閉起來，以減少殘留的硅醇基，減輕待測組分與酸性硅羥基反應而引起的色譜峰拖尾現象。尤其對于極性樣品而言，未封端處理的色譜柱分離效果較差。

（內容來源檢測家）

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